参考文献

    1.Anspach,F.,Curbelo,D.,Hatrmann,R.,Garke,G.,andDecwer,W.Expanded-bedchromatographyinprimaryproteinpurification.J.Chromatogr.A1999;865:129-144.2.Richardson,J.F.andZaki,W.N.Sedimentationandfluidization:PartI.Trans.Inst.Chem.Eng.1954;32:35-52.3.Thommes,J.Fl......查看详细>>

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3.1.1 使用无孔磁力吸附剂进行分批吸附

    对于少量样品(如约100mL),首先用结合缓冲液(pH值和离子强度参照吸附剂的适合条件)平衡吸附剂,然后将吸附剂与原材料在试管或烧瓶中混合。如果吸附剂粒径小且载体无孔的话,那么只需几分钟(通常5min即足够)即可达到吸附平衡状态......查看详细>>

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3.1.2 实例Ⅰ: 磁力吸附剂产品结合行为的简单表征

    下面通过实验解释如何评估磁力吸附剂对目标蛋白的回收效能。实验选用的原材料为添加有胰蛋白酶的干酪乳清;磁力载体经苯甲脒(一种丝氨酸蛋白酶抑制剂)衍生化[14],得到含有苯甲脒基团的磁力吸附剂。本例中,我们希望展示能解......查看详细>>

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3.1.3 高梯度磁力分离 (HGMS)

    高梯度磁力分离(high-gradientmagneticseparation,HGMS)的基本原理很简单,类似于深层过滤[16-21]。事实上,HGMS可以被认为是一种深层过滤系统,不同的是它在传统的深层过滤系统的运送机制中添加了磁引力。它的罐体中填充着可磁化的分离基质......查看详细>>

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3.1.4 高梯度磁钓技术 (HGMF)

    从分批结合步骤到利用高效磁力过滤器处理吸附剂(即吸附剂的捕获、清洗和洗脱)的整体过程,我们称之为HGMF[1]。该技术已经被广泛应用于从不同原材料中捕获蛋白质[1-14]。图3.2和图3.3分别呈现了典型的HGMF过程简图和半工业化的HG......查看详细>>

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3.1.5 HGMF过程设计

    如图3.6所示,对于基本HGMF过程的设计,将整个开发分为多个阶段是非常方便的,这在参考文献11中也有报道。过程设计首先应确定最合适的配体类型和磁力吸附剂,然后优化结合、清洗和洗脱条件。接下来是磁力过滤器捕获阶段,还应包括......查看详细>>

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3.2.1 磁力载体

    目前,多种不同设计的磁力载体材料已商品化,并且已应用于一些小规模的生物技术实验中(如质粒分离、细胞分选、常规诊断等)。如表3.1所示,作为一种磁力敏感型吸附剂,它的很多特性都与传统色谱介质的特性相似,但也具备一些特殊......查看详细>>

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3.2.2 配体的选择

    一旦确定合适的超顺磁载体,那么接下来对配体的选择也将是至关重要的。通过对目标蛋白、原材料和现有文献的了解,我们有可能得出高效配体的特点。但是,对于一个新蛋白质而言,我们必须通过筛选吸附剂的方法来确定合适的配体......查看详细>>

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3.2.3 实例Ⅱ: 采用小规模分批实验测定HGMF吸附剂的使用条件

    最近,Meyer及其同事[11]以从天然干酪乳清中回收超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)为例,提出了HGMF过程开发的一般策略(图3.6)。他们指出,HGMF吸附剂在各个阶段的最适使用条件可以通过小规模(1～5mL)分批实验迅速确定,直接传递入HGMF过......查看详细>>

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3.3 磁力分离系统的设计与建立

    目前,由于缺少市场,还没有适合于工业化下游工程的商品化磁力分离系统。尽管如此,磁力分离的物理原理、由平行的大规模生产获得的多样化设计及其固有优势,为其在即将到来的工业化下游工程中的应用进展提供了坚实的基础。磁......查看详细>>

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