酶联免疫吸附分析(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay,ELISA)的基本原理是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活力。在测定时...[继续阅读]

    (一)基本原理蛋白质等生物大分子物质在水溶液中以一种亲水胶体形式存在,无外界影响时,呈稳定的分散状态(如图3-1)。其主要有两个原因:一是蛋白质为两性物质,在一定pH条件下呈现一定的带电性,因而在水溶液中会因静电作用而相互...[继续阅读]

    溶液并不是在某一固定温度时凝结,而是在某一温度范围内凝结,当冷却时开始析出晶体的温度称为溶液的冰点,而溶液全部凝结的温度叫做溶液的凝固点,因为凝固点就是融化的开始点(即熔点),对于溶液来说也就是溶质和溶媒共同熔化...[继续阅读]

    当蛋白质达到足够的纯度时,就可以进行蛋白质的结晶。结晶作用有三个重要意义:一是作为一种稳定的储存方法;二是使样品达到高度均一状态的必要的纯化步骤,可认为是纯化后期的一个部分分级法;三是长成单晶后提供作为X射线衍...[继续阅读]

    实例1:运用FQRT-PCR和蛋白质免疫印迹检测连接蛋白Claudin-1在人类大肠癌细胞株的表达陈琳等为探讨密连接蛋白Claudin-1与人类大肠癌进展的关系,采用实时荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)和蛋白质免疫印迹,检测Claudin-1在3株不同分期人类大肠癌细胞...[继续阅读]

    透析的原理是指溶质从半透膜的一侧透过膜至另一侧的过程,任何天然的(如腹膜)或人造的半透膜,只要该膜含有使一定大小的溶质通过的孔径,那么溶质分子就可以通过扩散和对流从膜的一侧移动到膜的另一侧。其基本原理是分子的扩...[继续阅读]

    蛋白质的保存方法与其分子稳定性有很大关系,主要有干态储存和液态储存两种。不论是干态储存还是液态储存,均应避免长期暴露于空气中,防止微生物的污染。温度对蛋白质的稳定性影响很大,低温保存在大多数情况下是有利的。蛋...[继续阅读]

    (一)肽链的专一性水解最普遍有效的Edman降解法测肽链序列,一次只能连续降解数十个残基,故需将多肽先裂解成较小的肽段,分别测定。裂解时要求裂解点少,专一性强,收率高。方法基本分两大类:化学法和酶法。1.蛋白质的化学裂解化...[继续阅读]

    (一)多缓冲剂的选择多缓冲剂的选择是依据聚焦层析的pH梯度范围而定的,而pH梯度范围是受被分离样品的等电点、组成成分以及色谱柱分辨率等因素所控制的。通常使用多缓冲剂的pH间隔为1～3个单位,为提高分辨率,选择的实验pH范围...[继续阅读]

    质谱分析过程主要包含三个部分:离子化、质量分析和离子检测。下面从这三方面介绍其检测过程。(一)离子化技术质谱分析被认为是测定小分子的分子质量最准确最灵敏的方法。由于生物样品不稳定,电子轰击电离(EI)、化学电离(C...[继续阅读]