IEC广泛应用于包括蛋白质、多肽、氨基酸和有机酸等多种生化物质的分析分离,以及样品的脱色等方面,具有灵敏度高、重复性、选择性好、分析速度快等优点。IEC在蛋白质领域的应用主要包括蛋白质的分离纯化以及蛋白质等电点的测...[继续阅读]

    抗体(antibody)是机体在抗原物质刺激下,由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。1964年,世界卫生组织举行专门会议,将具有抗体活性以及与抗体相关的球蛋白统称为免疫球蛋白(Ig)。免疫球蛋...[继续阅读]

    当把一个带静电荷(Q)的颗粒放入电场时,便有一个电场力(F)作用于其上。F的大小等于质点所带净电荷量(Q)与电场强度(E)的乘积,可用下式表示:F=QE(5-1)由于F的作用,使带点颗粒在电场中向一定方向泳动。质点的前移还要受到阻力(F′)的...[继续阅读]

    (一)生成盐复合物沉淀法蛋白质等生物大分子和小分子都可以生成盐类复合物沉淀,此法一般可分为3种:与生物分子的酸性功能基团作用(如铜盐、银盐、锌盐、钙盐等);与生物分子的碱性基团作用(如苦味酸盐、苦酮酸盐、单宁酸盐等...[继续阅读]

    聚焦色谱(chromatofocusing)是在IEF方法的基础上演化出来的一种柱色谱技术,该方法进行蛋白分离纯化的依据是不同蛋白质等电点的差异和离子交换行为的原理。由于具有聚焦作用的性能,使得其具有高分辨率和浓缩样品的优点,同时,在层...[继续阅读]

    细胞表达外源基因,尤其是以大肠杆菌为宿主菌高效表达外源基因时,表达蛋白常常在细胞质内聚集,形成无活性的固体颗粒,即为包涵体(inclusionbody)。当重组蛋白以包涵体形式存在时,可获得高表达、高纯度的重组蛋白,避免蛋白酶对外...[继续阅读]

    末端分析可分为N末端测定和C末端测定两方面。(一)N末端的测定组成蛋白质每条多肽链的第一个氨基酸与内部氨基酸不同,它具有α-氨基,并称为N末端。化学法是先形成对酸较稳定的氨基衍生物,然后水解多肽,释放出标记的N末端氨基酸...[继续阅读]

    SDS-PAGE操作与上述PAGE的操作大体相似,其不同之处有:1.电泳前的样品处理按表5-12的配方,配制一定量的二倍样品缓冲液,在4℃条件下可储存数月。每次使用前,样品与样品缓冲液以1:1进行混合,煮沸5min,离心,作为点样用。2.电泳溶液的配...[继续阅读]

    (一)尿激酶的性质尿激酶(Urokinasc,简称UK,EC-3.4.21.31)最初从尿中检出而得名,后来发现它广泛地存在于哺乳动物和人的尿液、血浆中,此外在恶性增生的前列腺组织和肾细胞培养物中也能发现。UK是一种糖蛋白,属丝氨酸蛋白酶类,它的天然...[继续阅读]

    CE将经典电泳技术和现代微柱分离有机地结合,取得了比高效液相色谱(HPLC)和平板凝胶电泳更多的优点。概括起来可谓“三高二少一广”。高质量灵敏度:常用紫外检测器检测限可达10-15～10-13mol,激光诱导荧光检测(LIF)器则达10-21～10-...[继续阅读]