根据蛋白质分子在不同的pH条件下,带电性质不同进行分离纯化的方法主要有两种:电泳和离子交换层析法。一、电泳在外界电场的作用下,荷电的物质可以根据其携带电荷的性质向不同的电极方向以不同的速度移动,而得以互相分离。...[继续阅读]

    一、BALB/3T3细胞转化试验(一)原理　某些合适的细胞在离体培养情况下若用化学致癌物处理,可产生异常的表型和形态改变,成为转化细胞,因此采用这样的试验(称为细胞转化试验)能够半定量地评价某一种受检化学物的潜在致癌能力。...[继续阅读]

    一、影响酶测活的因素包括酶浓度、底物浓度、反应温度、pH值、离子强度等。(一)酶浓度　在测定酶活力时,如果固定底物浓度,以反应速度(V)为纵坐标,酶浓度([E])为横坐标作图,可得V-[E]曲线(图3-9-2-1)。由此图看出:当〔E〕<〔E0〕时...[继续阅读]

    原代培养物经首次传代成功后即为细胞系。它由原先已存在于原代培养中的细胞的许多谱系(lineages)组成。如果不能继续传代或传代数有限,称为有限细胞系(finitecellline),正常细胞的培养往往只能成为有限细胞系;相反,如可连续传代,则...[继续阅读]

    当培养细胞由于增殖而长满瓶壁时,即达到了所谓的饱和密度(saturationdensity)。此时,正常细胞则不再分裂;而恶性细胞则由于重叠生长(overlaping),细胞层较厚,易于从瓶壁上成片脱落下来。为此传代(subculture)便势在必行了。所谓传代,简单...[继续阅读]

    一、基本原理聚合酶链反应(PCR)是体外扩增DNA片段的分子生物学技术,目前在基础医学和临床上已有广泛应用。PCR反应要求有一定量的DNA作模板,模板DNA制备方法很多,例如酚-氯仿抽提纯化法;改进的盐析法;DNA粗制品的快速制备法等等。...[继续阅读]

    一、基本原理递减杂交(subtractivehybridization)是一种高效率的筛选特异基因的方法。与经典的菌落筛选最主要的区别是,递减杂交的探针DNA序列一般尚不知晓,待筛选的基因DNA序列亦为未知,唯一了解的是该基因所具有的特异功能。递减杂...[继续阅读]

    蛋白质一级结构的研究经历了漫长的历史。1955年F.Sanger等首次发表了牛胰岛素的一级结构。之后随着研究方法和手段的更新,蛋白质一级结构的分析向提高灵敏度,缩短工作周期的方向发展,现已有近千种蛋白质的一级结构已搞清楚了...[继续阅读]

    一、超氧阴离子自由基(O2)的测定检测方法有贤上腺素氧化,NBT还原法和细胞色素C(cytC)还原法等。(一)原理　多形核中性粒细胞(PMNL)激活后,发生呼吸爆发,释放O2等活性氧,O2可使高铁细胞色素C(cytC)发生还原变色反应。加入超氧化物岐化...[继续阅读]

    一、转化率低酵母的转化可采用两种方法:①原生质体法,由于YAC的插入片段通常≥100kb,每微克DNA只能获得数百至数千个克隆,比大肠杆菌转化率低上万倍。有人采用多巴胺提高转化率,但效果并不肯定。②电穿孔法,在大肠杆菌转化中...[继续阅读]