转基因动物技术是本世纪80年代初发展起来的一项生物技术。在这短短的10年中发展迅速。目前转基因技术已广泛应用于医学、遗传学、免疫学和农、牧学的基础与应用研究,具有广阔的应用前景。最早开展转基因动物的研究始于小鼠...[继续阅读]

    M13噬菌体含单链环形DNA,野生型M13DNA由6,407个核苷酸组成,含有10个基因。它感染宿主以后,并不使细胞死亡,只是生长速度减慢1～2倍,而M13本身在细胞内形成过渡阶段的双链复制型(RF)DNA,可扩增至约100到200拷贝。成熟的噬菌体为单链(正链...[继续阅读]

    人工酵母染色体(yeastartificalchromosome,YAC)是1987年由美国华盛顿大学医学院Burke和Olson发明的一项新技术。他们将外源的大片段DNA(通常在100kb～1000kb之间)重组在人工装配的载体中,此重组DNA分子转化酵母后能像天然的酵母染色体一样在酵...[继续阅读]

    一、原理与S1分析类似,通过分子杂交形成双链,单链部分通过酶解去除。但RNA酶保护分析与S1酶分析不同之处是:此处应用的是RNA探针,与检测的RNA互补形成双链,用RNA酶处理去除单链RNA。此法的优点是RNA探针是通过噬菌体RNA聚合酶合成...[继续阅读]

    用哺乳动物细胞作宿主表达体系具有以下主要优点:①哺乳动物细胞能识别和除去外源基因中的内含子,剪接加工成成熟的mRNA,这是原核细胞达不到的;②哺乳动物细胞表达的蛋白质在翻译后被加工的机会较多(如糖基化),可提高产品正确...[继续阅读]

    人皮肤易于获取,其细胞易于在体外生长,因此目前人皮肤成纤维细胞培养已在基础医学与临床医学研究中得到较广泛地运用。如用于研究细胞的老化(ageing),各种外来因子引起细胞的损伤,在体外条件下细胞的恶性转化(invitromalignanttr...[继续阅读]

    λ噬菌体是分子克隆工作中最常用的基因载体之一。λ噬菌体基因组所含DNA是由48,502bp组成的线性双链分子。DNA的两个末端各有一个十二核苷酸长的5′突出单链,而且两单链的碱基顺序是互补的。当噬菌体感染宿主大肠杆菌细胞后,D...[继续阅读]

    在应用一般方法提取的RNA中,大部分为tRNA和rRNA,mRNA只是一小部分,必须经过进一步的纯化获得mRNA。将RNA加热变性后使Poly(A)尾巴暴露,含有Poly(A)尾巴的mRNA结合到Oligo-dT纤维素上与Poly(A)-RNA分离。...[继续阅读]

    一、一般程序在对蛋白质一级结构进行分析前,应对蛋白质的纯度和分子量进行测定,其纯度应在97%以上。分析步骤:1.N-末端和C-末端的测定;2.拆分由亚基组成的蛋白质;3.拆分由二硫键连接的多肽链;4.多肽链的氨基酸组成的定量测定;...[继续阅读]

    外源双链cDNA是cDNA库构建中的“主角”之一。从细胞或组织中经过提取mRNA、合成第一链cDNA、合成第二链cDNA以及cDNA两端的处理,方能成为克隆用的外源cDNA(图4-6-1-1)。一、分离mRNAmRNA是合成cDNA的模板,通常mRNA的分离包括提取总RNA及分离...[继续阅读]