细胞淘洗法(elutration)首先由P·E·Lindahl于1948年报道,他利用这种装置分离了真核细胞、精子细胞、酵母细胞、艾氏腹水细胞等。直到1973年,Beckman公司生产了JE-6型离心转头后,这种分离系统才广泛地被应用。它适用于单个细胞悬液,也适...[继续阅读]

    层析法(chromatography)也称色谱法,是一种物理的分离方法。层析法最基本的特征是有一个固定相和一个流动相,当两相作相对运动时,由于混合物中各组分在物理化学性质(如吸附力、溶解度、分子的形状与大小、分子的电荷性及亲和力等...[继续阅读]

    YAC载体是以质粒pBR322为基础,由人工装配而成,具有染料体的关键部分中心粒、端粒和复制中心,克隆位点和筛选标记。以载体pYAC2为例说明载体必须具有的基本结构(图4-4-1-1)。图4-4-1-1　YAC载体结构和YAC构建的途径示意图一、中心粒(...[继续阅读]

    可用乙醇沉淀法来浓缩浓度不是太低的DNA溶液。但用乙醇沉淀法回收DNA时,总要丢失部分DNA,而且原始溶液浓度越稀丢失的便越多。因此必须采用另外一些方法将其浓缩。一、正丁醇法正丁醇能吸收大量的水,而DNA不溶于正丁醇。将等...[继续阅读]

    目前使用的宿主菌均为啤酒酵母,是Ade依赖型的SUP4突变株,该菌在全营养型培养基中,生长的菌落呈红色。最常用的菌株为AB1380,其基因型为:MATa,ade2-1,Ura3,can1-100,lysα-1,trp1,his5,ψ+。YPH274是最近用来转化由载体pJS97、pJS98构建的YAC的宿主菌...[继续阅读]

    一、原理所谓电泳,是指在外界电场的作用下,带电的物质向其所带电荷的相反电极方向移动。各种物质由于所带净电荷的种类和数量不同,因而在电场中的迁移方向和速度不同。利用物质的这种性质可以对物质进行分离和鉴定。带电...[继续阅读]

    已经在细菌、酵母菌和霉菌中测定了很多点突变,它们均经多种化学诱变剂的重复测定证明是可靠的。特别是Ames试验更被广泛采用。一、Ames试验(一)原理　Ames试验也叫鼠伤寒沙门氏菌/微粒体试验。一系列组氨酸营养缺陷型的沙门氏...[继续阅读]

    采用荧光偏振技术测定生物大分子物理状态、结构变化,有序性及微环境情况等,是一种常用的方法。本节主要介绍用一些常用的荧光探针,如DPH等测定生物膜膜脂流动性,以了解生物膜膜脂分子的运动信息。一、基本原理光为电磁波...[继续阅读]

    一、原理双链cDNA的合成分两步,首先提纯的完整mRNA在反转录酶参与下转换成单链cDNA,然后通过类似缺口翻译的过程,RNA-DNA杂合双链的RNA经RNaseH打开缺口并切除,由E.coliDNA聚合酶填补缺口合成cDNA片段,这些片段经E.coliDNA连接酶连接成完整...[继续阅读]

    细胞化学(cytochemistry)采用化学、物理或生物学等试验法,使组成和维持组织细胞形态和执行生理功能的生命大分子物质中的某些物质、反应基团和酶促活性,通过生成有颜色不溶性沉淀物,即最终反应产物(finalreactionproduct)的形式得以显...[继续阅读]