流式细胞技术(flowcytometry),是用流式细胞仪(flowcytometer)检测细胞和其它生物学颗粒性物质(以下统称生物颗粒)的物理和/或化学特性的技术。当液流中的生物颗粒单个地流进流式细胞仪中的激光照射域时,颗粒(或经荧光染色)受激光激发...[继续阅读]

    一、原理RACE(rapidamplificationofcDNAends)与合成反转录产物PCR(RT-PCR)相同,应用基因内特异引物和加接接头序列的Poly(dT)引物PCR扩增mRNA的5′、3′端。mRNA5′端的扩增需在在反转录的cDNA末端通过末端转移酶加接poly(dA)尾巴,制造引物结合序列...[继续阅读]

    一、低模板数样品PCR(一)增效PCR(boosterPCR)　当扩增少于1000拷贝的模板DNA时会遇到两个问题,一是形成引物二聚体,一是非特异扩增,消耗了引物和酶,而特异扩增片段产量却降低。对于这种情况,可设置二步PCR。先用较低浓度的引物进行初...[继续阅读]

    一、原理根据化学测序法原理,当DNA中G被硫酸二甲酯甲基化后就能被哌啶将链打断。若控制反应条件使只有部分G被甲基化,这样就可得到各种部分甲基化的混和物,如图4-13-5-1所示。若此DNA在一条链的3′端用32P标记,经哌啶反应将链从...[继续阅读]

    野生型λ噬菌体体基因组是双链线性DNA分子,全长为48,502bp,其中约40%的核苷酸序列是噬菌体生存非必需的,可被外源DNA片段取代,利用这一性质,从1974年以来,已成功构建了适用于不同目的的许多λ载体。一般来说,λ噬菌体作为载体分为两...[继续阅读]

    光学显微镜(lightmicroscope)是利用凸透镜等组成显微镜上的物镜和目镜将物体放大成像的作用,将细微物体放大,使其成像于人的视网膜或照相感光底片上,或投影于屏幕上,也可经摄像机接收显像于显示屏上,以观察物体的细微结构。光学...[继续阅读]

    在常规的凝胶(琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶)电泳中,凝胶以筛滤形式对DNA分子起大小分离作用。我们可以通过改变凝胶的成分(琼脂糖、聚丙烯酰胺、Sieving琼脂糖)或凝胶的浓度来控制分辨能力,使不同大小范围的DNA分子得到较好的分...[继续阅读]

    特异性寡核苷酸探针(allelespecificoligonucleotide,ASO)及用作PCR引物的寡核苷酸都是人工合成的。ASO探针一般长20bp左右,其序列跨越基因突变的位点,每一突变位点有两种ASO探针,分别与正常序列和突变序列互补。突变碱基所对应的位置一般...[继续阅读]

    一、基本原理目前,提取DNA和RNA的方法有多种,但多为分别提取DNA或RNA,而不能由同一样品同时提取DNA和RNA。故常使需要同时研究同一样品中DNA和RNA的工作既浪费样品,又增加操作步骤,耗物耗时,还易使所得DNA和RNA产生一定程度的相互污...[继续阅读]

    一、原理DNaseⅠ对DNA的作用是随机的,无碱基特异性。因此,在消化完全时,可将DNA切成单核苷酸。若控制适量的DNaseⅠ,将DNA部分消化,即条件控制在使DNA上的每一个核苷酸间的连接链上,只有大致相同百分数的部分被切,这样就形成一个一...[继续阅读]