三、PCR反应体系

    PCR反应体系要根据检测或扩增的目的片段不同而不同,一般含有:10×PCR缓冲液、dNTP、正反向引物、模板DNA、MgCl2溶液、TaqDNA聚合酶和无菌双蒸水等。在冰浴条件下,按顺序将各成分按比例加入0.2mL无菌离心管中(图6-1)。图6-1加样...查看详细>>

标签:水产苗种产地检疫实验

四、PCR扩增

    将上述混合液在低速离心机(500～800r/min)上离心30s后,即置PCR仪上,设置好相应的PCR反应程序,仪器将自动进行扩增(图6-2、图6-3)。反应结束,关闭PCR扩增仪,从PCR扩增仪中取出PCR产物,放置于4℃待电泳检测,或置于-20℃长期保存。PCR反应的一...查看详细>>

标签:水产苗种产地检疫实验

五、琼脂糖凝胶电泳检测

    琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作为支持介质的一种电泳方法,是分离和纯化DNA片段最重要的技术,不同的DNA分子量大小及构型不同,电泳时的泳动率就不同,从而分出不同的条带。(一)琼脂糖凝胶制备以1%琼脂糖凝胶制备为例。称取0.5g琼脂...查看详细>>

标签:水产苗种产地检疫实验

六、对照设立

    在样品处理过程中,应设立阳性对照、阴性对照和空白对照。(1)取已知阳性样本为模板作为阳性对照。(2)取正常的阴性样本为模板作为阴性对照。(3)取等体积的水代替样品为模板作为空白对照。...查看详细>>

标签:水产苗种产地检疫实验

七、结果判断

    在紫外灯下观察,阳性对照会出现一条相应大小的DNA片段,阴性对照和空白对照没有该核酸带。目的片段DNA存在,被检DNA样品则在一定的范围内显示出荧光条带,其大小与阳性对照样品相同,此时判断PCR反应为阳性;无带或者条带的大小与...查看详细>>

标签:水产苗种产地检疫实验

八、注意事项

    (一)PCR反应程序设置温度与时间的设置:在标准反应中采用三温度点法,双链DNA在90～95℃变性,再迅速冷却至40～60℃,引物退火并结合到靶序列上,然后快速升温至70～75℃,在TaqDNA聚合酶的作用下,使引物链沿模板延伸。1.变性温度与时间变...查看详细>>

标签:水产苗种产地检疫实验

一、系统组成

    计算机一台,显微镜(配备显微镜CCD摄像头)一台,打印机一台,远程会诊系统软件一套及网站服务器,并通过网络系统连接而组成。...查看详细>>

标签:水产苗种产地检疫实验

二、操作方法

    (一)开机打开电脑主机电源开关,显示器上会出现如下界面(初始界面)(图7-1)。图7-1初始界面(二)运行软件双击桌面上图标,输入用户名和密码,选择点击“登录网络版”,进入软件正常工作界面(图7-2)。图7-2登录界面登录选择说明:软件具...查看详细>>

标签:水产苗种产地检疫实验

一、草鱼出血病检疫操作

    草鱼出血病是危害草鱼(图8-1)、青鱼养殖的主要病害,己列入水产苗种产地检疫的必检目录。已知草鱼出血病的病原是草鱼呼肠弧病毒(Grasscarpreovirus,GCRV),也称为草鱼出血病病毒(Grasscarphemorrhagevirus,GCHV),是一种具有高度传染性的鱼类病...查看详细>>

标签:水产苗种产地检疫实验

二、锦鲤疱疹病毒病检疫操作

    锦鲤疱疹病毒病是鲤鱼和锦鲤的一种急性、接触性传染病,对锦鲤、鲤鱼危害均极为严重。该病多发于春、秋季,潜伏期14d。锦鲤疱疹病毒可感染任何年龄的锦鲤与鲤鱼,传播迅速,病鱼出现症状24～48h后开始死亡(水温低于18℃或高于3...查看详细>>

标签:水产苗种产地检疫实验