一、目的和要求1. 掌握外源基因在原核细胞中表达的特点。2. 了解外源基因在原核细胞中表达的方法。二、基本原理克隆基因在细胞中表达对于理论研究和实际应用都是十分重要的。在理论研究中,通过原核和真核系统表达并纯化的...[继续阅读]

    一、基本原理由一条RNA单链转录为互补DNA(cDNA)称作“逆转录”,由依赖RNA的DNA聚合酶(逆转录酶)来完成。随后,DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成,随每个循环倍增,即通常的PCR。原先的RNA模板被RNA酶H降解,留下互...[继续阅读]

    原核表达系统中外源基因的诱导表达的基本原理为:将外源基因克隆到表达载体中,转化到宿主菌-大肠杆菌中表达。先让宿主菌生长,Lac Ⅰ产生的阻遏蛋白与Lac操纵基因结合,从而不能进行外源基因的转录和表达,此时宿主菌正常生长。...[继续阅读]

    一、目的和要求1. 掌握从人外周血中提取、分离和纯化基因组DNA的基本原理和操作方法。2. 了解人体基因组DNA的特点与用途。二、基本原理人基因组由30亿对碱基组成,它包括单倍体细胞中的全部基因。基因不仅可以通过复制把遗传...[继续阅读]

    一、目的和要求1. 掌握转氨基作用的基本原理。2. 掌握纸层析的基本原理和操作方法。二、基本原理体内α-氨基酸的α-氨基在转氨酶(transaminase)的作用下,可逆地转移到α-酮酸,结果生成相应的α-酮酸,而原来的α-酮酸则转变成另一种氨...[继续阅读]

    蛋白质的定量分析是生物化学和其他生命学科最常涉及的分析内容。蛋白质测定的方法很多(见表10-1),需要在了解各种方法的基础上根据不同情况选用恰当的方法,以满足不同的要求。下面介绍Folin-酚试剂法、紫外分光光度法、考马斯...[继续阅读]

    一、目的和要求1. 掌握从动物中提取、分离和纯化RNA的基本原理和操作方法。2. 了解RNA的生物学特性及其在研究中的应用。二、基本原理细胞内大部分RNA均与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在。因此分离RNA时必须使RNA与蛋白质...[继续阅读]

    一、目的和要求1. 掌握胰蛋白酶的提取原理和方法。2. 了解胰蛋白酶初步纯化的方法。二、基本原理生理情况下,无活性的胰蛋白酶原存在于动物的胰脏中。当它进入小肠后,在钙离子的存在下,胰蛋白酶原被胰蛋白酶或肠激酶从N-端切...[继续阅读]

    一、目的和要求1. 学习测定糖酵解作用的原理和方法。2. 了解酵解作用在糖代谢过程中的地位及生理意义。二、基本原理在动物、植物、微生物等许多生物机体内,糖的无氧氧化几乎都按相同的过程进行。动物肌肉组织中肌糖原在缺...[继续阅读]

    常见的分子克隆中所需的基因片段制备方法包括通过基因组文库分离、筛选基因,cDNA文库分离、筛选基因,人工合成基因和应用PCR获取目的基因等。一、通过基因组文库分离、筛选基因基因组文库(genomic library)是指用基因克隆的方法保...[继续阅读]