马铃薯青枯病病菌PMA-PCR活菌检测体系优化与初步应用

摘要： 应用叠氮溴化丙锭(PMA)与PCR技术相结合,建立一种有效快速检测包括活的非可培养状态(Viable But Non-Culturable,VBNC)在内的马铃薯青枯菌活菌的方法。根据青枯菌lpxC基因序列设计特异性引物lpxC5a/6a,探究不同PMA浓度、曝光时间对浓度为1×10~9 cfu/m L的热致死菌悬液中死亡菌体抑制效果的影响,确定PMA最佳处理方案,对采自云南地区的19份田间土样中的包括VBNC状态在内的青枯菌活菌进行检测。结果显示,引物lpx C5a/6a可特异性扩增青枯菌而产生304 bp的条带。当样品中PMA终浓度为40μmol/L,650 W卤素灯曝光15 min,PMA可有效抑制死亡菌体的扩增,而对包括VBNC状态在内的青枯菌活菌的扩增没有影响。在19份田间土样检测中,有7份土样检测出存在青枯活菌。 （共9页）