白藜三醇对人脐静脉内皮细胞血管生成的影响及其可能机制

摘要： 目的:探究白藜三醇(Res)对正常状态下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管生成的影响及其可能机制。方法:体外培养HUVEC,实验分为:DMEM高糖(<4 500 mg/L)培养基培养组(正常组)、白藜三醇组(药物组)、白藜三醇+磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)阻断剂组(LY294002,药物阻断剂组1)、LY294002组(阻断剂组1)、白藜三醇+NG-硝基-L-精氨酸甲酯盐酸盐组(一氧化氮合酶阻断剂L-NAME,药物阻断剂组2)、L-NAME组(阻断剂组2),其中LY294002为磷脂酰肌醇3-激酶阻断剂。采用CCK-8法检测细胞增殖情况;免疫印迹(Western blot)法检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)蛋白的表达;亚硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的水平;迁移小室(transwell chamber)检测内皮细胞的迁移能力;小管形成实验检测内皮细胞的体外小管形成能力。结果:1药物组(1、5μmol/L)与正常组相比细胞增殖增加(P<0.01);药物组(5μmol/L)与药物组(0.2、10、20μmol/L)相比细胞增殖增加(P<0.01);药物组(20μmol/L)对细胞增殖有抑制作用(P<0.01),差异均有统计学意义。2药物组(5μmol/L)较正常组p-Akt、p-eNOS蛋白表达增加(P<0.05~0.01),NO水平增加(P<0.05),差异均有统计学意义;药物阻断剂组1 p-Akt、p-eNOS蛋白表达与药物组比较均减低(P均<0.01),NO水平减低(P<0.05);药物阻断剂组1(5μmol/L)较阻断剂组1 p-Akt蛋白、p-eNOS蛋白及NO差异均无统计学意义(P均>0.05)。3细胞迁移及小管形成实验:药物组(5μmol/L)内皮细胞迁移率及体外小管形成数量大于正常组(P<0.01),药物阻断剂组2内皮细胞迁移率及体外小管形成数量小于药物组(P<0.01)。结论:白藜三醇可能通过激活PI3K/Akt/eNOS信号通路诱导正常状态下内皮细胞NO水平的增加,从而促进内皮细胞增殖、迁移及体外小管形成。 ... （共5页）