自身抗原组氨酰转移核糖核酸合成酶的基因克隆和原核表达研究

摘要： 目的研究建立用克隆、表达和鉴定人自身抗原组氨酰转移核糖核酸合成酶(HARS,亦称Jo1抗原)检测多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)自身免疫抗体的方法。方法用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)从HL60细胞株中克隆人自身抗原Jo1全长基因,将PCR产物直接进行TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEX5T载体中,并转入大肠杆菌BL21;阳性克隆鉴定后在异丙基βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达,然后对其产物进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和蛋白质印迹法(IBT)检测。结果PCR产物约1500bp,与预期1526bp接近,测序结果与基因库核酸完全一致。pGEX5TJo1重组阳性克隆酶切鉴定正确,SDSPAGE和IBT结果显示,融合蛋白分子量75000,具有天然人自身抗原Jo1的免疫原性。结论成功克隆表达人自身抗原Jo1,为建立PM/DM自身免疫抗体检测方法奠定了基础。 ... （共3页）