Rh抗原Fab抗体库的构建与筛选

摘要： 目的:构建抗体库并筛选Rh抗原的Fab抗体。方法:收集5份血清中抗Rh抗体效价在1∶256～512的人淋巴细胞,提取RNA,用多对引物PCR扩增VH、Vκ、Vλ基因,并分别从pComb3xTT和pComb3xλ噬粒中扩增CH1、Cκ、Cλ,通过重叠PCR,构建重链Fd基因及完整的kappa、Lamda轻链,并进一步重叠PCR,获得Fab抗体片段。Fab经酶切、连接并电转化到噬菌体抗体表达载体pComb3xSS中,构建获得抗Rh的Fab抗体库,经4轮Rh(-)/Rh(+)红细胞阴/阳淘筛,获得的阳性克隆分别进行血凝试验、Western blot分析及测序鉴定。结果:构建获得总库容为7.4×106的Fab抗体库,并从中筛选得到1株能特异结合Rh抗原的Fab抗体。结论:应用基因工程抗体技术,成功获得了1株能与Rh(+)红细胞特异凝集的Fab抗体,为制备能用于临床的特异性强、效价高,并具有自主知识产权的Rh抗体打下基础。 ... （共4页）