抗藤黄微球菌Rpf结构域单克隆抗体的制备与特性鉴定

摘要： 目的:克隆、表达藤黄微球菌Rpf结构域多肽,并制备针对该多肽的单克隆抗体(mAb)。方法:采用聚合酶链反应(PCR)藤黄微球菌基因组中扩增出藤黄微球菌Rpf结构域基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后,再亚克隆到融合表达载体pPro-EXHT中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的Rpf结构域基因多肽,在变性条件下纯化目的蛋白。用纯化的目的蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合、克隆化制备抗Rpf domain单抗(mAb),用ELISA法初步鉴定其特异性和相对亲和力。结果:在变性条件下用Ni2+-NTA亲和色谱柱纯化目的融合蛋白,纯化获得的蛋白纯度大于90%。用该融合蛋白免疫小鼠后,获得了3株抗Rpfdomain mAb,这3株mAb均特异性识别Rpf domain多肽。结论:所获得的抗Rpfdomain mAb特异性强、效价高,对进一步研究Rpf domain在结核病免疫预防中的作用提供了有力的工具。 ... （共4页）