乙型肝炎病毒E抗原反式激活靶基因的克隆化研究

摘要： 目的　应用抑制性消减杂交 (SSH )技术及生物信息学技术 (bioinformatics)筛选并克隆乙型肝炎病毒 (HBV)e抗原(HBeAg)反式激活新型靶基因。方法　以HBeAg表达质粒pcDNA3 .1(-) HBeAg转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 .1(-)为平行对照 ,提取mRNA并进行抑制性消减杂交 (SSH)分析。对于所获基因片段序列分析表明 ,其中之一为新型基因片段 ,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性 ,利刚表达序列标签 (EST)序列的搜索和比对 ,进行电子拼接 ,根据基因起始密码子的KozaK规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列 ,确定新型基因序列。从HepG2细胞提取总RNA ,以逆转录多聚酶链反应 (RT -PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列 ,并测序证实 ,命名为HBeAgTP ,在GenBank中注册 ,注册号为AY42 3 62 4。结果　HBeAgTP基因的编码序列全长为 3 2 4个核苷酸 (nt) ,编码产物由 10 7个氨基酸残基 (aa)组成。结论　HBeAg反式激活新型靶基因HBeAgTP的筛选与克隆 ,为进一步研究HBeAg在体内激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础 ... （共3页）