1970—1990年是新离子化技术迅速发展的时期。其中的两个技术即基质辅助激光解离/离子化(MALDI)和电喷雾离子化(ESI)从此被确立了在生物分子质谱中的特殊地位。这些离子化的软方法甚至可以将像蛋白质这样大的生物分子在非解聚的...[继续阅读]

    8.5.1质谱分析仪有效和可靠质谱分析仪的导入是在生物分析中建立质谱的基本原则。在这方面的关键技术是四极杆分析器、离子阱、时间飞行(TOP)分析仪。TOP质谱的工作原理已经在20世纪40年代建立起来;离子阱和四极杆分析器是50年代...[继续阅读]

    多肽含有20个构成蛋白质的氨基酸、以肽键(酰胺)线性连接在一起。这意味着每一个肽只有一个游离的氨基端和一个游离的羧基端(参见第2章)。习惯上,肽链的顺序(无论是用3个字母还是1个字母代表)表示成左边是N-末端,右边是C-末端...[继续阅读]

    今天的蛋白数据库涵盖了来源于不同物种的几乎2×106蛋白序列。由于生命以进化和保守的方式发展,实际上已经得到的只有一小部分统计上可能的蛋白质序列。由于这个原因,要有把握地鉴别蛋白质只需要部分序列。当未知蛋白质被水...[继续阅读]

    电喷雾离子化允许分子质量达到数百单位(ku)的蛋白质被转化成为完好的气体状态。这种离子化的蛋白质图谱含有数个峰[图8.6(A)],每一个代表了不同带电状态的蛋白质。蛋白激酶A催化亚基的纳升ESI图谱[pKa,如图8.6(A)所示]显示了23～...[继续阅读]

    大多数细胞蛋白在共价或者后翻译水平上被修饰。共价修饰经常发生在N-末端氨基或者侧链氨基酸的半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、精氨酸和天冬氨酸上。可能的修饰从简单的化学修饰(例如甲基化)到形成高度复合的结构(例如...[继续阅读]

    Aebersold,R.,Goodlett,D.R.2001,Massspectrometryinproteomics,Chem.Rev.101,269-295.Hamdan,M.H.,Righetti,P.G.,Desiderio,D.M.,Nibbering,N,M.2005,ProteomicsToday:ProteinAssessmentandBiomarkersUsingMassSpectrometry,2DElectrophoresis,andMicroarrayTechnology,Wile...[继续阅读]

    脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)可以从活体或者保藏的组织、细胞、病毒颗粒或者其他样品中提取用于分析与制备。由于打算使用的目的和基因材料的来源变化很大,不存在一个通用的分离方法。尽管如此,在整个生物界中RNA和DNA的...[继续阅读]

    从原核生物、真核生物和病毒之类的生物中提取DNA是从细胞或病毒壳的解体开始的。解体是通过酶消化、表面活性剂或者机械力来获得的。当从真核生物中提取DNA时,进行细胞核的分离中间可以去除细胞器DNA(如线粒体DNA)。根据需要...[继续阅读]

    与DNA提取相似,RNA的分离是去除像蛋白质或者脂类一样的其他分子。使用有机溶剂将RNA与这些污染物分开。然而,在处理RNA时有几个方面与DNA不同。多数细胞类型在它们的细胞质中与mRNA并存含有大量的RNA酶,它通常是分析提取的关键。...[继续阅读]